Un equipo de investigadores del Centre de Recerca en Sanitat Animal (IRTA-CReSA) ha desarrollado una nueva prueba de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) para la detección del virus de la peste porcina clásica (VPPC), una de las enfermedades más importantes en la sanidad animal. Esta innovación promete ser una alternativa rápida, sensible y económica frente a las técnicas actuales como la RT-PCR en tiempo real (RT-qPCR), especialmente en zonas donde los equipos especializados y personal cualificado no están fácilmente disponibles.
La peste porcina clásica, causada por el virus ssRNA (+) del género Pestivirus, representa un desafío significativo para el control de la enfermedad. Las estrategias de control actuales dependen de diagnósticos rápidos mediante pruebas ELISA y RT-qPCR, pero estas técnicas requieren equipos especializados y personal capacitado, lo que no siempre está disponible en granjas y mataderos, especialmente en países en desarrollo. Esto retrasa la obtención de resultados y la implementación de medidas de control.
La técnica LAMP-PCR presenta una solución prometedora debido a su capacidad de detección mediante métodos fluorimétricos y colorimétricos, que no requieren equipos complejos. En este estudio, se diseñó y validó un nuevo ensayo LAMP para detectar el ARN del VPPC utilizando ambos métodos de detección. Se evaluaron cepas virales de tres genotipos circulantes del virus, así como muestras de animales infectados y otros patógenos para determinar la especificidad de la prueba.
El ensayo LAMP demostró un rendimiento óptimo a diversas temperaturas de amplificación (60 °C-68 °C) y una sensibilidad comparable a la RT-qPCR en muestras de ARN extraídas magnéticamente del genotipo 1 del VPPC. Sin embargo, la detección colorimétrica mostró limitaciones en muestras de suero, probablemente debido a las propiedades tampón del suero que afectan el cambio de pH necesario para la detección visual. Esta limitación podría superarse mediante la dilución del suero o el uso de muestras menos invasivas como hisopos nasales y rectales.
Los resultados del estudio indicaron que la prueba colorimétrica LAMP coincidió con el 93,3 % de los resultados de la RT-qPCR y fue capaz de detectar ARN viral en todas las muestras después de 14 días de infección. Además, la detección colorimétrica mostró un mejor rendimiento en comparación con la fluorimétrica en muestras de animales infectados experimentalmente con el genotipo 2 del VPPC.
A pesar de su efectividad, la prueba CSFV-LAMP puede detectar inespecíficamente el ARN del virus del OVPV debido a la proximidad genómica entre ambos virus. Sin embargo, esta reactividad cruzada es poco probable que ocurra en condiciones de campo debido a la rápida generación de anticuerpos que reduce la carga viral circulante del OVPV.
Este desarrollo representa una herramienta valiosa para la detección del VPPC en entornos de campo, donde las formas subclínicas y crónicas de la enfermedad aún persisten. La integración de técnicas diagnósticas nuevas y tradicionales podría facilitar una detección temprana del virus, permitiendo una respuesta rápida y efectiva, y contribuyendo significativamente a la erradicación de la peste porcina clásica.
Es fundamental establecer normas y directrices oficiales para el uso de estas pruebas en programas de vigilancia y control de enfermedades, conforme a las recomendaciones de la Organización Mundial de Sanidad Animal (OMSA).